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艾美捷告訴您如何選擇合適的二抗分子類型?

發布者:艾美捷科技    發布時間:2011-03-26     
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二抗是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體,上面通常連有酶、熒光素或生物素等耦聯標記。二抗針對某一特定物種(如小鼠)的所有抗體(如IgG、IgMIgA等)均具有反應性,因而使用標記的二抗可以免去對每個一抗進行標記,大大節省了時間和費用;此外,一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子,從而使信號大大增強,提高了實驗靈敏度。通常情況下,某一特定的實驗中可能同時有幾種二抗可供選擇,如何能選擇到最適合該實驗的二抗,需要綜合以下幾個方面進行考慮:

 

1.     選擇全IgG形式還是F(ab’)2片段,或者Fab片段二抗
 

       Picture1.jpg

 

    全IgG形式的二抗是從抗血清中分離出來的完整的分子;這些抗體有一個Fc部分和兩個與抗原結合的Fab部分,因此是二價的,也是性價比最高的。 F(ab’)2片段形式的二抗是用胃蛋白酶消化IgG去除Fc部分,剩下兩個靠二硫鍵連接的結合抗原的Fab部分,依然是二價的;該抗體可避免與Protein A /G或與Fc受體的結合, 還由于其分子本身比較好,更容易滲透入細胞組織結構內而靈敏度更高 。Fab片段形式的二抗是用木瓜蛋白酶消化IgG后得到的;Fab片段抗體由于只含有一個結合位點,可用來封閉內源性的免疫球蛋白。

 

2.     根據一抗的種屬來源和類型選擇二抗

 

        二抗應選用與使用的一抗相同的物種來源,例如:如果一抗是小鼠源的抗體,二抗則選抗小鼠的二抗;如果一抗是從兔血清里制備的兔源抗體,則相應的二抗需要選擇抗兔的二抗。另外,二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會在產品說明書中都會有描述,如果一抗是小鼠IgM,那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM。如果一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合,或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗。至于二抗本身是在什么動物中制備的對二抗的質量并無明顯的影響。艾美捷科技能為您提供最全種屬的二抗產品。

Picture2.gif 

3.     根據實驗要求的特異性進一步篩選二抗

        Anti-IgG (H+L)是最常用也是性價比最高的二抗形式,這類抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈都可以反應,也可以和其他的免疫球蛋白家族(IgM,IgA,IgD,IgE)和亞家族反應,因為所有的免疫球蛋白都有相同的輕鏈。 Anti-IgG,Fc fragment specific這類抗體和IgG重鏈的Fc部分反應,與F(ab’)2Fab無交叉反應,但可能與IgMIgA有交叉反應;而抗IgG,Fcγ fragment specific則只與IgG重鏈反應,通常不能和IgAIgM任何表位反應。 Anti-IgG,F(ab’)2 fragment specific則與Anti-IgG,Fc fragment specific則正好相反。

      

         另外,與一個物種反應的二抗可能與其他物種發生交叉反應,除非這類抗體經過其他物種的血清蛋白吸附實驗。如Jackson Horseradish Peroxidase-conjugated AffiniPure Mouse Anti-Goat IgG (H+L) (min X Ms, Hu, Rb Sr Prot) 小鼠抗山羊二抗,就是經過了小鼠、人、兔血清的吸附, 其與小鼠、人、兔血清內蛋白(包括免疫球蛋白)的交叉反應降到最低。 當其他物種免疫球蛋白的出現可能導致交叉反應時,推薦使用這類抗體。

 

作為多家知名品牌的中國代理或區域代理,艾美捷向您推薦并提供最高品質和最多用途的各種標記的二抗產品,包括HRP及AP酶標二抗、 FITC/Rhodamine /Cy系列/DyLight系列等熒光二抗等均為原裝進口包裝,高效敏感,能為您提供最值得信賴的抗體產品保障和售后服務。

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