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基因克隆技術

發布者:艾美捷科技    發布時間:2021-07-07     
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基因克隆技術是分子生物學的核心技術,分子克隆指的是在體外將核酸分子插入病毒、質?;蚱渌d體分子,構成遺傳物質的新組合,使之進入宿主細胞內并獲得持續穩定增殖能力和表達?;蚩寺〖夹g的發展經歷3個階段:

第一階段為經典的T4 DNA連接酶介導的TA克隆及粘性末端克??;

第二階段為基于DNA修飾酶的LIC系列克??;

第三階段為基于DNA重組酶的Gateway克隆及一步法克隆。


1、即用型表達克隆,構建表達載體所用的酶以及中間載體

提供140,000個預制即用型Nextday-ORF 克隆。無需再等上數日/數周即可馬上進行基因表達或蛋白表達實驗。每一個Nextday-ORF?克隆均經過序列驗證,次日寄送,且多種病毒、非病毒類載體可選。


詳情查看:1、一步到位or從頭開始,GeneCopoeia基因克隆滿足你所有想象


2、轉染試劑

細胞轉染是指將外源基因如DNA,RNA等導入細胞內的一種技術。根據哺乳動物細胞蛋白表達流程,細胞培養完成后需進行細胞轉染,根據不同的實驗目的可選擇不同的轉染方法。目前,常用的細胞轉染方法主要分為三類途徑:物理介導(電穿孔法,基因槍法、顯微注射法)、化學介導(脂質體轉染法、磷酸鈣共沉淀法、陽離子聚合物介導法)、生物介導(病毒介導轉染、原生質體轉染)。


詳情查看:1、GeneCopoeia轉染試劑,攻堅克難:快、準、狠


3、構建表達載體

Gateway克隆技術作為一種可以快速、高效將DNA序列轉移到載體上的克隆方法,Gateway技術依賴于下面描述的兩個反應:BP反應和LR反應,通過BP反應獲得入門克隆(有時候我們也說中間克隆),再通過LR反應將目的DNA以正確的方向連接到各種目的載體上,形成不同的表達載體。向大家介紹BP反應-構建入門載體和LR反應-構建表達載體:


詳情查看:1、Gateway克隆技術高深莫測?


4、熒光素酶

熒光素酶(luciferase)是自然界中能夠產生生物熒光的酶的總稱。熒光素和熒光素酶這一生物發光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達,是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區DNA相互作用的一種檢測方法。

其中要介紹有:1、螢火蟲熒光素酶(Firefly luciferase);2、海腎熒光素酶(Renilla luciferase);3、Gaussia 分泌型熒光素酶;4、分泌型堿性磷酸酶(secreted alkaline phos-phatase,SEAP)


詳情查看:1、神奇的熒光素酶(一),知否知否
詳情查看:2、神奇的分泌型熒光素酶(二),知否知否


產品推介: 

1、構建表達載體所用的酶以及中間載體


貨號載體名稱規格描述
RCBM-1001-020EZRecombinase LR Mix20次反應催化attL x attR重組反應,高效率酶,與Gateway 克隆技術完全兼容
RCBM-1001-100100 次反應
RCBM-1002-020EZRecombinase BP Mix20次反應催化attB x attP重組反應,高效率酶,與Gateway?克隆技術完全兼容
RCBM-1002-100100 次反應
貨號載體名稱規格類型
EZ001pEZ-Lv19910ug慢病毒表達載體
EZ003pEZ-Lv23310ug
EZ004pEZ-Lv19510ug
EZ006pEZ-Lv20110ug
EZ007pEZ-M0210ug哺乳動物細胞表達載體
EZ008pEZ-M1310ug
EZ009pEZ-M6710ug
EZ010pEZ-M6810ug
EZ011pEZ-M9810ug
EZ012pEZ-SH0110ugHuman Safe Harbor載體
EZ013pEZ-SH0210ugMouse Safe Harbor載體
EZ014pEZ-B0110ug大腸桿菌表達載體
EZ015pEZ-B0210ug
EZ016pEZ-Lv23510ug慢病毒表達載體
EZ017pEZ-Lv23610ug
EZ018pEZ-Lv23710ug
EZ019pEZ-Lv23810ug
EZ021pEZ-P00210ug植物表達載體
EZ023pEZ-P00410ug
EZ026pEZ-P00710ug
EZ027pEZ-P00810ug
EZ029pEZ-P01010ug
EZ030pEZ-P01110ug
EZ031pEZ-P01210ug
EZ032pEZ-P01310ug
EZ033pEZ-M0610ug哺乳動物細胞表達載體
EZ034pEZ-M0910ug
EZ035pEZ-M1210ug
EG001pShuttle-D0110ug穿梭載體
EG002pShuttle-D0210ug

2、轉染試劑

貨號

名稱

適用性

EF003

EndoFectin? Max轉染試劑 (1 mL)

廣泛適用于多種細胞

EF004

EndoFectin? Max轉染試劑 (3 mL)

EF015

CRISPR-Fectin? 轉染試劑 (1 mL)

優化的CRISPR-Cas9核蛋白專用的轉染試劑??膳cGeneHero? Cas9蛋白配合使用

EF015

EF016

EF007

EndoFectin? Expi293 轉染試劑 (1 mL)

專注轉染懸浮細胞293F,轉染效率極高

EF009

EndoFectin? Expi293 增強轉染試劑盒 (1L 轉染用量)

EF010

EndoFectin? Expi293 增強轉染試劑盒 (10L 轉染用量)

EF005

EndoFectin? HepG2 轉染試劑 (1 mL)

為常用細胞系HepG2進行優化設計

EF006

EndoFectin? HepG2 轉染試劑 (3 mL)

EF001

EndoFectin? Lenti轉染試劑 (1 ml)

轉染293T細胞,可收獲更高滴度的慢病毒

EF002

EndoFectin? Lenti轉染試劑 (3 ml))


 3、BP反應-構建入門載體和LR反應-構建表達載體


貨號名稱說明
RCBM-1002-020EZRecombinase? BP Cloning Kit (20 rxn)Catalyzes attB x attP cloning(催化BP反應)
RCBM-1002-100EZRecombinase? BP Cloning Kit (100 rxn)Catalyzes attB x attP cloning(催化BP反應)
RCBM-1001-020EZRecombinase? LR Cloning Kit (20 rxn)Catalyzes attL x attR cloning(催化LR反應)
RCBM-1001-100EZRecombinase? LR Cloning Kit (100 rxn)Catalyzes attL x attR cloning(催化LR反應)


4、熒光素酶

 

貨號產品名稱產品特性熒光素酶規格
LF001Luc-Pair? Duo-Luciferase Assay Kit 2.0 Hot !穩定型螢火蟲(Fluc)
海腎(Rluc)
100rxns
LF002300rxns
LF0031000rxns
LF004Luc-Pair? Duo-Luciferase HS Assay Kit Hot !高靈敏型螢火蟲(Fluc)
海腎(Rluc)
100rxns
LF005300rxns
LF0061000rxns
LF007Luc-Pair? Firefly Luciferase HS Assay Kits高靈敏型螢火蟲(Fluc)100rxns
LF008300rxns
LF0091000rxns
LF010Luc-Pair? Renilla Luciferase HS Assay Kit高靈敏型海腎(Rluc)100rxns
LF011300rxns
LF0121000rxns
LF013Luc-Pair? Duo-Luciferase HT Assay Kit穩定型, 無需預先裂解細胞,適用高通量分析螢火蟲(Fluc)
海腎(Rluc)
10mL
LF01430mL
LF015100mL
LF016Luc-Pair ? Firefly Luciferase HT Assay Kit穩定型, 無需預先裂解細胞,適用高通量分析螢火蟲(Fluc)10mL
LF01730mL
LF018100mL
LF019Luc-Pair? Renilla Luciferase HT Assay Kit穩定型, 無需預先裂解細胞,適用高通量分析海腎(Rluc)10mL
LF02030mL
LF021100mL

熒光素酶報告基因載體:

貨號產品啟動子報告基因示蹤基因篩選標記抗性研究
ZX001pEZX-FR01(10?g)N/A*Firefly
(hLuc)
Renilla
(Rluc)
PuromycinKanamycin常規啟動子等研究
ZX002pEZX-FR02(10?g)SV40Firefly
(hLuc)
Renilla
(Rluc)
N/A*AmpicillinUTR靶標等研究
ZX003pEZX-FR03(10?g)miniCMVFirefly(
hLuc)
Renilla
(RLuc)
PuromycinKanamycin轉錄因子結合位點等研究
貨號名稱規格產品特性
LF031Secrete-PairTM Dual Luminescence Assay Kit100rxns無需破碎細胞,吸取上清;檢測Gluc 和SEAP酶活性
LF032300rxns

 

分泌型單熒光素酶檢測試劑盒

貨號名稱規格產品特性
LF061Secrete-PairTM Gaussia Luciferase Assay Kit100rxns無需破碎細胞,吸取上清;檢測Gluc的酶活性
LF0621000rxns

 

熒光素酶報告基因載體:

貨號產品描述規格
ZX101pEZX-GN01pEZX-GN01 包含Gluc和SEAP的報告載體10?g
ZX102pEZX-GN03pEZX-GN03 包含Gluc和SEAP的報告載體10?g
ZX103pEZX-GA01pEZX-GA01 包含Gluc和SEAP的報告載體10?g
ZX104pEZX-GA02pEZX-GA02 包含Gluc和SEAP的報告載體10?g
ZX105pEZX-GA03pEZX-GA03 包含Gluc和SEAP的報告載體10?g
ZX106pEZX-LvGN01pEZX-LvGN01 包含Gluc和SEAP的報告載體 (lentiviral)10?g
ZX107pEZX-LvGA01pEZX-LvGA01 包含Gluc和SEAP的報告載體 (lentiviral)10?g


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